产品概述

荧光量子产率测定试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，当荧光团吸收光子时，就会形成能量激发态。荧光团及其周

围环境的确切性质，会影响该生物物种的形态，但结果是仍然是失活（能量损失）并返回基态。

实验方案

样品实验方案

表1

参考 水中的荧光量子产量 用以下染料或类似波长染料标记的缀合物（用于参考标准选择）

参考1 0.98 FAM, 6-TET, 6-HEX, 6-JOE, FITC, Cy®2, Alexa Fluor® 488 and 514, iFluor™ 488 and 514, DyLight™ 488, or other dyes that have an emission of 500 ± 50 nm

参考2 0.20 Cy3®, Alexa Fluor® 514, 532, 546 and 555, iFluor™ 514, 532 and 555, DyLight™ 555, TRITC, or other dyes that have an emission of 550 ± 50 nm

参考3 0.44 Texas Red®, Texas Red®-X, Alexa Fluor® 594, iFluor™ 594, California Red™, DyLight™ 594, or other dyes that have an emission of 600 ± 50 nm

参考4 0.24 Cy5®, Cy5.5®, Cy7®, Alexa Fluor® 633, 647, 700 and 750, iFluor™ 633, 647, 700 and 750, DyLight™ 650, 680 and 755, or other dyes that have an emission of 650 ± 50 nm 

1.使用储备溶液制备的稀释溶液和水性缓冲液（例如PBS或TRIS）记录所选标准品和测试样品（0.1至5μM）的吸光度光谱。

2.根据吸收值选择激发波长。我们建议使用以下公式来选择所需的激发波长：

所需的激发（nm）=较短的吸收值* - 50nm

*例如，如果您的测试样品在500 nm处具有吸收，并且所选参考标准在490 nm处具有吸收，则应选择440 nm（490 nm - 50 nm）作为激发波长。 

3.调整所选参考标准品和测试样品的浓度，使其在选定的激发波长下具有相同的吸光度（在0.2至0.8之间）。

4.使用相同的缓冲液或纯水稀释所选参考标准品与测试样品进行10倍稀释（必须用相同比例稀释）。

5.使用可以产生校准荧光光谱的荧光分光光度计或酶标仪在10mm荧光比色皿中记录相同稀释溶液的荧光光谱。注意：必须使用相同的仪器设置记录所有荧光光谱。更改样品之间的仪器设置将使量子产率的测量无效。

数据分析

1.从完全校准的荧光光谱计算荧光强度（参见仪器说明书）。

2.使用以下等式计算荧光量子产率：Φr = Φs * Ar/As

Φř和Φs分别为选择的参考标准和测试样品的荧光量子产率。Ar和As分别是所选参考标准品和测试样品的积分荧光强度（曲线面积）。

图1.荧光原理：电子被外源激发到更高的能级，返回到其基态后，将释放一定数量的光子，该光子与电子的能量损耗成比例地释放。 光子的释放表示荧光发射。荧光团的量子产率是其发射的光子与吸收的光子之比。