产品参数

产品概述

Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因检测的试剂盒，β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因，而这其中，萤火虫荧光素酶是功能多的报告基因。近，其它荧光素酶的使用在逐渐稳固的上升，例如来源于海洋桡脚类的动物高斯基质衍而来的生物发光酶，即高斯荧光素酶。由于高斯荧光素酶受体分子非常小，因此不需要ATP的辅助。高斯荧光素酶是一种分子量为20kDa的蛋白质，在氧分子存在条件下，催化腔肠素氧化形成荧光。Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒使用独特的荧光基质对细胞培养基中荧光素酶活性进行定量检测。我们所提供的荧光产品与高斯荧光素酶反应时，会产生强烈荧光。本试剂盒提供所有必需组分，并且适用于HTS（高通量筛选）研究。本试剂盒灵敏度高，可以便捷地用于96或384微孔板分析。本检测法适合标准的细胞生长培养基。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒。 

百萤问号：荧光素酶到底该如何检测？

适用仪器

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备样品（50 µL）
2.加入50 µL高斯荧光素酶工作溶液
3.在室温下孵育10-15分钟
4.检测荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下，避免重复冻融循环。
1.1高斯荧光素酶原液（100X）：
将50 µL（对于Cat＃12530），0.5 mL（对于Cat＃12531）或2.5 mL（对于Cat＃12532）反应缓冲液（组分B）转移到1小瓶荧光素酶底物（组分A）中，并充分混合。

2.工作溶液

使用1：100稀释因子和检测缓冲液（组分C）稀释100X高斯萤光素荧光素酶的检测储备液，以制备高斯萤光素荧光素酶工作溶液。 注意：高斯荧光素酶工作溶液对光非常敏感，它很不稳定，应放在冰上，并在2小时内使用。

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样品操作及分析

1.用测试化合物处理细胞（或样品），在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）。对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在37°C，5％CO2培养箱中孵育一段时间（通常为4小时至过夜）。

3.进行高斯荧光素酶检测：将连续稀释的高斯荧光素酶或培养上清液的96孔板（50 µL /孔） 或384孔板（12.5 µL /孔）移液到微量滴定板中，然后与高斯荧光素酶工作溶液混合。

4.在避光的条件下，在室温下孵育平板10至15分钟。

5.用酶标仪读取荧光强度。