外置泵 薄膜过滤器 CYW-300B 内置泵不锈钢一次性微生物限度检测仪

微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文对生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。
　　一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。
　　1. 微生物计量法
　　1.1 体积测量法
　　又称测菌丝浓度法，通过测定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取量的待测培养液（如10 mL）放在有刻度的离心管中，设定的离心时间（如5 min）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有偏差。
　　称干重法
　　可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10~20%。在离心法中，将体积待测培养液倒入离心管中，设定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1~5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80 ℃或40 ℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40 ℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（Activity Dry Yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
　　1.3 比浊法
　　微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600 nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.coli的生长及诱导时间。

蛋白质芯片技术
　　蛋白质芯片技术又称蛋白质阵列，是指将已知的大量蛋白质固定在经化学修饰的固相载体上，在保留蛋白质物化性质的基础上，蛋白质与载体表面结合，再用激光扫描系统或者电感耦合器件获取相关图像；然后用专门的计算机软件分析图像、定性定量结果。Howell等采用俗称软蚀刻的微接触印刷技术制作出了一种可以检测大肠杆菌E.coli O157∶H7及鲑杆菌的抗体微阵列，结果表明：此芯片与其他有害微生物的交叉反应少，检出浓度为7×107cfu/ml，检测时间是40min，是一种很有效的微生物检测方法。
　　方珍建立了检测E.coli O157
　　H7的液相蛋白芯片方法。通过绘制检测曲线，分别应用该方法及H2O作溶解剂的液相芯片方法检测实际牛肉样品。比较该方法与细菌分离培养法的阳性检出率，能检出阳性的低浓度为103cfu/ml，低检出限为100cfu/ml；与18种肠道菌无交叉反应，特异性良好；3次重复实验，批间变异系数7.61，重复性良好；应用该方法检测牛肉样品中人工添加细菌，能检出阳性的低浓度为0.5cfu/ml；应用该方法检测154份实际牛肉样品，检出阳性样品19份，而细菌培养法检出阳性样品16份。蛋白质芯片技术是一种高特异性、高灵敏度、高通量、重复性好、应用性强、适用范围广且微型化的分析技术，在生命科学的各个研究领域有很好的发展前景，但同基因芯片技术一样，检测费用高，发展还不成熟。
　　纳米金标记技术
　　纳米金标记技术是指直径在1nm—100nm金的微小颗粒，具有高电子密度，介电特性和催化作用，可以与多种生物大分子结合，且不影响生物大分子的生物活性。近年来，基于纳米金标记的快速检测研究在有害微生物方面应用比较多，检测的微生物种类也比较多，国内外科技工作者通过对纳米金颗粒表面特性的处理以及在纳米金颗粒表面标记上特定的寡核苷酸探针，开发研究出了新的微生物检测系统。
　　利用氨基偶联法在传感器表面固定多抗体作为一抗，金纳米粒子标记的大肠杆菌E.coli O157∶H7的多抗体作为二抗，通过三明治方法用双通道表面等离子体共振传感器对E.coli O157∶H7进行检测。SPR直接法检出限为103cfu/ml，线性范围为103cfu/ml—109cfu/ml；金纳米粒子增强三明治法的检出限为10cfu/ml，线性范围为10cfu/ml—1010cfu/ml，灵敏度提高100倍，检测范围更宽，检测时间缩短，选择性和重现性较好。此技术具有简单、快速、灵敏度高、特异性强、价廉、样品所需量少等优点，适合现场筛选，在饲料检测中有着广泛的应用价值和发展前景。
　　目前，生物学领域的专家通过对微生物快速检测方面深入的研究，开发了一系列技术，有ATP荧光仪、多功能微生物荧光检测仪、微生物实时光电检测系统、纸片法。这些用于食品中有害微生物的快速检测技术，未来同样可以在饲料中应用，这些方法的应用将为饲料安全提供有力的保障，同时可以促进我国饲料工业的持续健康发展。下面重点介绍常用的两种有害微生物快速检测设备。