不锈钢无菌过滤器 CYW-300B 微生物限度检测仪 玻璃滤杯重复灭菌

4.3培养
将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30～35℃下培养48小时，将白色、黑曲霉在23～28℃下培养72小时，点计菌落数。
5.试验结果
5.1产品试验组微生物生长检查情况： 批号：
5.2供试品对照组微生物生长检查情况： 批号：
5.3稀释剂对照组微生物生长检查情况： 批号：
5.4菌液组微生物生长检查情况： 批号：
6.回收率计算
6.1稀释剂对照组菌回收率
表中：回收率=稀释剂对照组的平均菌落数÷菌液组的平均菌落数。
6.2试验组菌回收率
表中：回收率=（试验组的平均菌落数－供试品对照组的平均菌落数）÷菌液组的平均菌落数。
7.结论：
7.1经过验证，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色、黑曲霉的回收率分别为 %、 %、 %、 %、 %。
7.2稀释剂回收率为 %、 %、 %、 %、 %。
以上验证结果证明，本品 采用上述方法进行微生物限度检查。
检验人： 复核人：
8.验证结果评价分析
质控部负责各项验证、试验结果记录，验证小组根据验证、试验结果进行评价，起草验证报告，报验证委员会。
验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书。对验证结果的评审应包括：
（1） 验证试验是否有遗漏；
（2） 验证实施过程中对验证方案改，修改原因、依据以及是否经过批准；
（3） 验证记录是否完整；
（4） 验证试验结果是否符合标准要求，偏差及对偏差的说明是否合理，是否需进一步补充试验。
9.*终审批
验证报告由验证组长审核后，报验证总负责人批准，并签发验证证书。
验证报告
年 月 日至 年 月 日，验证小组根据批准的微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证文件对微生物限度检查法进行了相关的一系列验证工作，达到了预期效果，滋将有关事项说明如下：
1、 验证方案在实施过程中未做修改。
2、 验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在允许范围内。
3、 验证过程中结果符合规定要求，记录完整属实。
4、 验证结果符合设计要求和GMP原则要求，可以投入使用。
5、 组分或检验条件改变时须重新验证。
以上情况，请验证委员会审批！

微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600 nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.coli的生长及诱导时间。
　　1.4 菌丝长度测量法
　　对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长。
　　2. 微生物计数法
　　2.1 血球计数板法
　　血球计数板是一种有结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm，每个平台上刻有不同规格的格网，0.1 mm2面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计大格内微生物的数量，即可算出1 mL菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。
　　2.2 染色计数法
　　为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在 下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在 下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。
　　2.3 比例计数法
　　将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按比例均匀混合，在 视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。
　　2.4 液体稀释法
　　对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5 mL试样，接种1 mL到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查大或然数表MPN（Most Probable Number）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。
　　2.5 平板菌落计数法
　　这是一种常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9 cm的平板上出现50~500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次分离培养，获得了。
　　2.6 试剂纸
　　在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC，无色）待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。
　　2.7 膜过滤法
　　用特殊的滤膜过滤体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外 下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。
　　3. 间接测定法
　　微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。因此可利用生理指标等间接参数来测定生物量。
　　3.1 测定含氮量
　　大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。