两种花青衍生物Cy3和Cy5亚磷酰胺是用于制备荧光标记的寡核苷酸的最常用的荧光标记试剂。 通常在5'末端添加一次花青染料,并且应在合成仪上除去MMT保护基。MMT阳离子(黄色)的吸光度与DMT阳离子(橙色)明显不同,因此三苯甲基吸光度可用于监测寡核苷酸偶联。含有花青染料的寡聚物的脱保护可以在室温下用氢氧化铵进行,而不管所用单体上的碱保护基团如何。如果在升高的温度下使用氢氧化铵,则Cy3和Cy3.5比Cy5和Cy5.5更稳定。使用具有碱不稳定保护基团的单体以在脱保护期间将暴露时间限制在65℃下2小时或更短时间。
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