Amplite 荧光 ssDNA 定量试剂盒 *针对微孔板酶标仪进行了优化*

简要概述

Amplite 荧光 ssDNA 定量试剂盒以简单准确的方式来检测单链 DNA。该试剂盒包含所有基本试剂，包括 Helixyte Green ssDNA 试剂、稀释缓冲液和预稀释的 DNA 标准品。 Helixyte Green ssDNA 试剂是一种灵敏的荧光核酸探针，用于定量溶液中的寡核苷酸和单链 DNA (ssDNA)。它使科研人员能够量化低至 100 pg/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。这种灵敏度超过吸光度方法的 10,000 倍以上。使用该试剂盒，可检测低至 1 ng/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。使用该试剂盒对一些 ssDNA 进行了定量，包括具有相似灵敏度的 M13 和 φX174 病毒 DNA 以及变性小牛胸腺 DNA。它们的检测限不受核酸制剂中常见污染物的明显干扰，包括盐类、尿素、乙醇、氯仿、去污剂、蛋白质、ATP、核苷酸和六碱基短寡核苷酸等。然而，双链 DNA (dsDNA) 和 RNA 确实会干扰检测，因为 Helixyte Green ssDNA 试剂会与 dsDNA 和 RNA 结合以产生荧光信号。 Amplite 荧光 ssDNA 定量试剂盒经过优化，可使用荧光酶标仪定量 dsDNA。

适用仪器

产品说明书

实验方案

概述

1.添加 100 µL ssDNA 标准品或测试样品
2.添加 100 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液
3.在室温下孵育 5-10 分钟
4.检测 Ex/Em=490/525 nm 处的荧光强度

注：以下方案是使用 Helixyte Green ssDNA 定量总核酸含量的示例。 打开前让所有成分升温至室温。 目前没有发现关于 Helixyte Green ssDNA 染色剂的致突变性或毒性的数据。 由于该试剂与核酸结合，因此应将其视为潜在的诱变剂并小心处理。 应特别小心处理 DMSO 原液，因为已知 DMSO 可促进有机分子进入组织。

溶液制备

ssDNA 标准溶液
将 10 uL 100 ug/mL ssDNA 标准溶液（组分 C）添加到 190 uL 检测缓冲液（组分 B）中以获得 5 ug/mL 标准溶液，然后进行 1:3 稀释以获得连续稀释的 ssDNA 标准溶液（SS2- SS7）。请使用AAT Bioquest连续稀释计算器以方便数据处理。

Helixyte Green ssDNA 工作溶液

将 100 μL Helixyte Green ssDNA（组分 A）加入 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，制备 Helixyte Green ssDNA 工作溶液。 通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。
注意：建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备工作溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。为获得效果，该溶液应在稀释后几小时内使用。
注意：10 mL 的工作溶液对于一个 96 孔板就足够了。

操作步骤

表 1. 纯黑色 96 孔板中 ssDNA 标准品和测试样品的布局。 SS= ssDNA 标准品（SS1 - SS7，1667 至 2.3 ng/mL）； BL=空白控制； TS=测试样品

表2.各孔试剂组成

1.根据表 1和表 2 中提供的布局准备 ssDNA 标准 (NS)、空白对照 (BL) 和测试样品 (TS)。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂，而不是 100 μL。
2.将 100 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液加入 ssDNA 标准品、空白对照和测试样品的每个孔中，使测定体积为 200 µL/孔。 对于 384 孔板，将 25 µL 的 Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每个孔中，以获得 50 µL/孔的总体积。
3.在室温下孵育反应 5 到 10 分钟，避光。
4.使用 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff在 515 nm 处）的荧光酶标仪检测荧光增加。

图示

图 1. ssDNA 剂量反应是在 96 孔黑色孔板中使用 Amplite Fluorimetric ssDNA 定量试剂盒测量的。