仅供科研使用，不得用于临床检验。

小鼠单 抗体Ig六种亚型鉴定试剂盒（ELISA）

说明书

【产品名称】

通用名称：小鼠单 抗体Ig六种亚型鉴定试剂盒（ELISA）

【包装规格】

96人份/盒

【预期用途】

仅供科研使用，定性检测血清、血浆、细胞培养上清液中小鼠单 抗体Ig六种亚型。

【检验原理】

本试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在空白微孔酶标板中包被特异性抗原（固相抗原），加入待测样本，经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，再加入HRP标记的抗小鼠免疫球蛋白（Ig）抗体亚型（酶标二抗），共有六种亚型，经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗体-酶标二抗的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 酸）作用下，终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与小鼠单 抗体亚型的浓度呈正相关。

酶标稀释液已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、500ml量筒

7、无粉一次性乳胶手套

【储存条件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。

  2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

  3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】

  半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。

【样本要求】

  样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

样本保存和稳定性

样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

【检验方法】

试剂准备

1、使用前，所有的组分都要至少复温120min，确保充分复温到室温。

2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。

3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。

操作程序

一、预包被板制备

1、用包被液将特异性抗原稀释到2-5ug/ml（一般用2ug/ml）浓度的包被工作液。

2、将包被工作液加入空白微孔板中，每孔100uL。

3、室温放置过夜（12h）。

4、弃去包被工作液，在洁净卫生纸上拍干，每孔加入150uL封闭液。

5、37℃温育120min。

6、弃去封闭液，在洁净卫生纸上拍干，放室温干燥6h。

7、用自封袋收好预包被板，避免潮湿。