简要概述

传统的BCA蛋白质检测法用于定量蛋白质。但是，它的检测效率低下，例如，您必须在37°C下加热BCA反应30分钟，或者在室温下等待两个小时。 Amplite 比色法BCA蛋白定量测定试剂盒是一种用于检测总蛋白浓度的拥有两组分且与洗涤剂兼容的检测试剂盒。该检测基于相同的铜螯合反应，可提供与传统BCA蛋白质检测相当的准确性，传统BCA蛋白质检测可在高温或更长的孵育时间下进行。在560 nm附近检测蛋白质信号，并在30分钟内完成测定。它方便，快速且稳定，无需高温。 Amplite 比色BCA蛋白定量分析试剂盒可以以方便的96孔板进行操作，无需分离步骤即可轻松实现自动化。

适用仪器

产品说明书

样品分析方案

概述

准备BCA工作溶液（50 µL）
添加BSA标准品或测试样品（50 µL）
在室温下孵育20-60分钟
在562 nm（540-590 nm的范围内）读取吸光度

注：使用前，请在室温下解冻所有试剂盒组分。

标准溶液制备：

BSA标准溶液：

将160 µL的1 mg / mL BSA标准溶液（组分C）添加到240 µL的PBS（未提供）中，以生成400 µg / mL的BSA标准溶液（BS1）。然后在PBS中使用1：2的系列稀释液以获得系列稀释的BSA标准品（BS2-BS7）。注意：在每次测定中必须创建标准曲线。

工作溶液制备

BCA工作溶液：

1.通过将50份BCA溶液A（组分A）与1份BCA溶液B（组分B）（50：1，溶液A：B的体积比）混合，制备所需的BCA工作溶液量。
2.充分混合，直到BCA工作溶液为均匀的浅绿色。
注意：1 mL BCA工作溶液足以进行20次检测。

操作步骤

表1.在透明的底96孔板中BSA标准品和测试样品的布局BS = BSA标准品（BS1-BS7，400至6.25 µg / mL）; BL =空白控件； TS =测试样品

表2:每个孔的试剂

1.根据表1和表2提供的布局准备BSA标准（BS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。
2。将50 µL BCA工作溶液添加到BSA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总测定体积为100 µL /孔。
3.将反应在室温下孵育20至60分钟。
4.使用光吸收酶标仪在OD 562 nm（540到590 nm范围）内检测吸光度。

图示

图1.使用透明的底96孔板，使用Amplite比色BCA蛋白定量分析试剂盒测量BSA剂量响应。