仑昌硕生物    小鼠羟基类*醇脱氢酶（HSD）elisa试剂盒

       单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM,简称单增李斯特菌)是李斯特菌属的代表种,能引起人和多种动物的李斯特菌病.LM为细胞内寄生菌,其致病性依赖于细菌毒力因子的产生,其中主要的毒力因子为单增李斯特菌溶血素O(Listeriolysin O,LLO).LLO由hly基因编码的一种蛋白,分子质量为58.6ku～60ku,是一种孔形成毒素,能够协助细菌破坏吞噬体,促进菌体进入胞液,是细菌得以在细胞液内增殖的先决条件,也是主要的毒力因子,它的缺失将会导致细菌毒力的全部丧失.为了进一步研究单增李斯特菌溶血素O,轻链均为κ链;特异性鉴定结果表明2株抗体均与LLO蛋白发生特异性反应,而与载体蛋白无反应.证实本研究制备了抗LLO的特异性单 抗体. (3)取重折叠LLO免疫新西兰大白兔,用两种免疫方法免疫动物,每次免疫剂量为200μg,一种免疫方法为常规免疫方法,即免疫以等量的完全佐剂进行乳化,背部皮下多点注射,2周后,以等量的不完全佐剂乳化后,背部皮下多点注射,2周后,以不完全佐剂乳化后,进行第三次免疫;新的免疫方法,免疫同常规免疫方法,4 d后再次以完全佐剂乳化后,背部皮 射,第30 d以不完全佐剂乳化后进行免疫.经3次免疫后,获得了兔抗LLO的多 抗体.经生物学统计分析,两种免疫方法所获得的免疫效果差异极显著,即新的免疫方法具有一定的应用价值. (4)取亲和力较高的单 抗体株,作为包被抗体,以重折叠LLO免疫制备的兔抗LLO多抗为检测抗体,建立检测LLO的间接夹心ELISA体系,优化了夹心ELISA的检测条件,初步建立了检测LLO的间接夹心ELISA方法.

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       目的:建立基于重组溶血素单抗的单核李斯菌ELISA检测方法.方法:从5株抗单核增生性李斯特菌的杂交瘤细胞中,筛选亲和力较高的单 抗体,用W estern-b lot鉴定,Prote in A纯化,HRP标记,经交叉配伍筛选出的抗体组合.结果:建立了单核李斯特菌的ELISA检测方法,对单核增生性李斯特菌的检出浓度为5.2×108/L,本检测方法特异性强,与常见细菌没有交叉反应.结论:基于重组蛋白单抗的单核李斯菌ELISA检测方法的建立为单核李斯特菌的特异性诊断提供了有效手段.目的建立双抗体夹心ELISA法定量检测重组人干扰素αlb的方法。方法筛选具有不同抗原结合位点的抗重组人干扰素αlb单 抗体,分别作为包被抗体和辣根过氧化酶标记抗体,建立双抗体夹心ELISA法定量检测不同批次重组人干扰索仅1b含量,评价该法的检出限、精确度、重复性、特异性。结果所建立的ELISA出限为10ng/ml,检测线性范围10—100ng/ml,R2=0.992,测定值与实际值偏差〉5%,板间变异系数均小于10%。结论该方法灵敏度高,特异性强,准确性和重复性好,可用于重组人干扰素αlb成品的定量检测。

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         单核增生性李斯特氏菌(Listeria Monocytogenes, LMO)是人和动物一种重要的食源性细菌,该菌属于革兰氏阳性小杆菌,在免疫缺陷的病人,新生儿,孕妇及动物可导致十分严重的病,称之为李氏杆菌病.该病以脑脊髓炎,脑膜炎,败血病,流产为主要特征.LMO对环境抵抗里很强,可以在酸性,高盐及低温环境下生存,在生的或加工过的食品中也可以发现LMO.LMO还可以在厌氧的环境中生长,在真空包装的食品中仍然可以发现LMO.当食用了LMO污染的食物后,LMO很快穿透肠道屏障到之后散布到脑和胎盘.LMO可以寄生在吞噬细胞中,并可以在吞噬泡膜上打孔而进入宿主胞浆中复制.近几年LMO在各地引起的食物中毒,引起了科学家和官员的注意.本文在概述中介绍了LMO的背景,生物学特性,LMO的毒力因子,感染的分子生物学进展,并且比较分析了近几年LMO的检测技术研究进展. 李氏溶血素(Listeriolysin O, LLO)是LMO逃离宿主吞噬泡的主要毒力因子.LLO可以从单核本文对提包涵体的方法进行优化,获得了相对纯度比较高的包涵体.利用亲和层析纯化蛋白,获得了纯化的重组李氏溶血素蛋白.Western-blot分析证明,重组李氏溶血素融合蛋白具有免疫活性.融合蛋白可溶性分析证明,蛋白以几乎不溶于水的包涵体形式存在. 本研究利用纯化的重组李氏溶血素融合蛋白免疫家兔,获得诊断抗体.利用谷胱甘肽转移酶吸收处理诊断抗体,以消除诊断抗体中抗谷胱甘肽转移酶抗体的干扰.然后用此诊断抗体和BHI培养基培养的LMO上清发生反应,初步在实验室建立了阻断ELISA检测LMO的方法.实验优化了重组LLO的包被浓度,诊断抗体的工作浓度,并进行了特异性分析和检测数分析,初步在实验室建立了利用重组LLO检测LMO的ELISA方法.

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