Cell Meter™细胞粘附测定试剂盒

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简要概述

Cell Meter™细胞粘附测定试剂盒是一种快速灵敏的测定方法，用于测量多种细胞类型的细胞-细胞或细胞表面粘附力。在该测定中，将细胞用钙黄绿素UltraGreen AM标记并使其贴壁。去除非贴壁细胞后，使用钙黄绿素UltraGreen的荧光来计算贴壁细胞的数量。使用我们的荧光染料Calcein UltraGreen AM，可以提供一种快速而灵敏的方法来测量多种细胞类型的细胞粘附性。钙黄绿素UltraGreen AM是无荧光的，但一旦加载到细胞中，就会被内源性酯酶裂解，产生高荧光的钙黄绿素UltraGreen，这是一种荧光强，不依赖pH值的细胞质细胞标记，对细胞粘附过程的干扰小。Cell Meter™细胞粘附测定法设计用于荧光酶标仪。

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产品说明书

样品分析方案

概述

添加细胞

在37°C下孵育细胞使其贴壁

去掉未贴壁细胞

添加Calcein Ultragreen AM工作溶液

在37°C下孵育细胞20-30分钟

去除上清液并用HHBS或DPBS洗涤细胞

使用荧光酶标仪（Ex / Em = 490/525 nm）检测荧光强度 

储备溶液配制

钙黄绿素超绿AM储备溶液
向Calcein Ultragreen AM（组分A）中加入50 µL DMSO（组分C）并充分混合。
注意：将未使用的Calcein Ultragreen AM储备溶液分装在-20°C下，一次性使用，以免冻融循环。

工作溶液配制

钙黄绿素超绿AM工作溶液
将50 µL钙黄绿素Ultragreen AM储备溶液添加到10 mL粘附测定缓冲液中，并充分混合。
注意：不应储存Calcein Ultragreen AM工作溶液，应立即使用。
注意：10 mL Calcein Ultragreen AM工作溶液足以进行100次测试。

操作步骤

以下方案可用作指导，应根据需要进行优化。

1. 在涂有所需试剂的板上添加100 µL体积的细胞。

2. 在37°C下孵育平板2至3小时。
   注意：对于每种细胞系，孵育时间应通过实验进行测试。

3. 除去生长培养基和未贴壁的细胞。

4. 加入100 µL钙黄绿素Ultragreen AM工作溶液，并在37°C下孵育平板20-30分钟。
   注意：对于每种细胞系，孵育时间应通过实验进行测试。

5. 除去染料工作溶液，并用1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液或DPBS洗涤细胞一次。

6. 在孔中加入100 µL粘附测定缓冲液。

7. 使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）处检测荧光强度。 

图示

图1.在荧光酶标仪中使用Cell Meter™细胞粘附测定试剂盒测量的细胞粘附。将不同程度的Jurkat细胞在加有不同试剂的孔中孵育，然后在37°C下用Calcein Ultragreen AM染色30分钟。在Ex / Em = 490/525 nm处检测信号。