Amplite人载脂蛋白B（ApoB）试剂盒*针对ELISAPro自动ELISA处理进行了优化*

简要概述

Mabtech的经过仔细验证的ELISAPRO试剂盒提供了所有必需的试剂，以方便，可靠，特异的方式方便地定量测定血清，血浆和细胞培养上清液中的分析物。

ELISA测定原理

ELISAPRO试剂盒随附有预先涂有（mAb）。样品中的分析物被包被的mAb捕获，并被生物素化的检测mAb和链霉亲和素-HRP（SA-HRP）检测。

血清和血浆样品分析

ELISAPRO试剂盒包括Apo ELISA缓冲液，一种可防止假阳性信号的缓冲液。缓冲液可阻止嗜异性抗体交联测定抗体。嗜异性抗体通常存在于人血清/血浆中，也可以存在于其他物种中。缓冲液已使用来自健康人类献血者的血清/血浆样品进行了验证。

所需材料

1. 酶标仪可在450 nm读取

2. ELISA平板清洗器；自动或手动（例如，多移液管或喷射瓶）、精密移液管，吸头和量筒

3. 用于标准和样品稀释的试管

4. 蒸馏水或去离子水 

安全信息

Stop溶液0.18 M H2SO4（<1％）对眼睛和皮肤有刺激性，应小心处理。由于不知道暴露的影响，因此应仔细处理该标准。溶液中的缓冲液和试剂含有防腐剂Kathon CG（0.002％），这是一种潜在的过敏原，可能通过皮肤接触引起过敏。人和动物样品应被视为潜在危险的生物材料。所有材料应按照当地法规进行处理。有关更多信息，请查阅我们网站上的《安全数据表》。

制备

在开始测定之前，让板和测定试剂达到室温（TMB底物除外，使用冷底物）。
计划板布局，使其一式两份，包括标准曲线，样品和测定背景对照。每孔的体积不应超过100μl。

产品说明书

样品实验方案

储备溶液配制

1.洗涤缓冲液

将50 ml洗涤缓冲液浓缩液添加到950 ml蒸馏水或去离子水中（足以完成1个板的所有洗涤步骤）。如果在20倍浓缩物中形成了晶体，则将其升至室温并轻轻混合以溶解。

2. Apo ELISA缓冲液

用蒸馏水或去离子水将Apo ELISA缓冲液浓缩液稀释5倍，以制备所需体积的Apo ELISA缓冲液。对于每个板，将30 ml Apo ELISA缓冲液浓缩液添加到120 ml水中。

3.样品

所有样品均应在Apo ELISA缓冲液中稀释至少2倍。除去可见的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀释，应在样品之前添加缓冲液。高度溶血和高血脂的样品可能会导致定量结果不准确。为防止不同的LDL粒径干扰，所有血清/血浆来源的样品均应在Triton X-100缓冲液中稀释2倍，然后涡旋振荡5秒钟。Triton X稀释对于细胞系产生的样品不是必需的，并且不会干扰其他载脂蛋白的分析。避免冻融循环，因为它会导致信号降低。

4.人血清/血浆稀释指南

根据对空腹健康受试者的反复分析，我们建议稀释系数为5000X。精确的移液非常重要，在稀释步骤之间更换吸头，并使用新鲜制成的稀释液。试剂的数量足以重复使用。

5. ELISA标准

apoB标准品是由50％甘油稳定的纯化LDL。浓度为125μg/ ml。无需分装标准液，因为高含量的甘油可使标准液保持液态。储存在-20°C。

6.编制标准曲线

如图所示，稀释标准储备溶液以创建标准曲线。试剂的数量足以重复使用。 后一个样品瓶用作测定背景对照，即应省略标准液。在使用30分钟内准备标准曲线。

工作溶液配制
1.检测抗体
使用后15分钟内，将检测抗体在Apo ELISA缓冲液中稀释至1μg/ ml的浓度。对于每个板，在12 ml Apo ELISA缓冲液中稀释12μl检测抗体。

2.链霉亲和素
在使用后的15分钟内，将抗生蛋白链菌素-HRP用抗生蛋白链菌素-HRP稀释剂稀释1000倍。对于每块板，在12 ml的链霉亲和素-HRP稀释液中稀释12μl的链霉亲和素-HRP。
 
操作步骤

1. 用洗涤缓冲液（300μl/孔）洗涤板5次。 后一次洗涤后，将其倒置并用吸水纸吸水。然后立即进行下一步。

2. 添加样品（至少稀释2倍），标准液和测定背景对照（100μl/孔）。敲击板混合。用粘性板盖覆盖板，并在室温下孵育2小时。

3. 如上所述清洗板。

4. 添加检测抗体（100ul/孔）。盖好板并在室温下孵育1小时。

5. 如上所述清洗板。

6. 加入抗生蛋白链菌素-HRP（100μl/孔）。盖好板并在室温下孵育1小时。

7. 如上所述清洗板。

8. 添加TMB底物（100ul/孔）。在避开直射光的室温下孵育15分钟。

9. 如上所述清洗板。

10. 在15分钟内测量450 nm处的吸光度。如果可能，请使用能够减去570至650 nm参考波长的酶标仪。