Annexin V-生物素缀合物

产品介绍

膜联蛋白（Annexins）是一类钙离子依赖性磷脂膜结合蛋白家族。其中，膜联蛋白V（Annexin V）作为细胞凋亡研究的重要工具，能够特异性识别细胞表面暴露的磷脂酰丝氨酸（PS）——这一特征不仅存在于细胞凋亡过程，也可见于其他形式的细胞死亡。

在凋亡过程中，PS会从细胞膜内侧翻转至外侧。这种细胞表面PS的暴露是凋亡早期/中期的普遍标志，其可检测性甚至早于细胞形态学变化的发生。目前，细胞活性的监测可通过多种参数实现，而基于膜联蛋白V-荧光染料偶联物（Annexin V-dye conjugates）的PS外翻检测法已成为凋亡监测的金标准。

生物素标记膜联蛋白V偶联探针（Annexin V-Biotin conjugate probe）是目前灵敏度 高的膜联蛋白V偶联物之一，与各类荧光标记链霉亲和素（streptavidin）联用时，可实现对细胞凋亡的 监测

百萤生物为AAT Bioquest授权的中国区域代理商
注：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床及其他非科研用途!

操作步骤摘要

1.制备含测试化合物的细胞样本（200 µL/样本）

2.加入膜联蛋白V偶联物检测溶液

3.室温避光孵育30-60分钟

4.使用流式细胞仪进行分析

储存与处理条件

荧光标记膜联蛋白V偶联物储存于含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS缓冲液(pH 7.4)中。为保持稳定性，建议-20℃避光保存，避免反复冻融（可能影响蛋白完整性）。在推荐条件下可稳定保存至少6个月。 

标准实验方案

膜联蛋白V偶联物细胞孵育步骤

1.配制膜联蛋白V结合缓冲液：10 mM HEPES，140 mM NaCl，2.5 mM CaCl₂，pH 7.4

2.用测试化合物处理细胞诱导凋亡（如：Jurkat细胞用星形孢菌素处理4-6小时）

3.离心收集细胞（1-5×10⁵细胞/管）

4.用200 μL膜联蛋白V结合缓冲液重悬细胞

5.加入2 μL膜联蛋白V偶联物

（可选）加入死细胞染料如碘化丙啶（货号17585）标记坏死细胞

6.室温避光孵育30-60分钟

7.在用流式细胞仪分析细胞之前，加入300μLAnnexin V缀合测定缓冲液（来自步骤1）以增加体积

8.使用流式细胞仪检测荧光强度

流式细胞仪检测

使用匹配滤光片的流式细胞仪定量膜联蛋白V结合情况

注：贴壁细胞因收获过程可能损伤膜结构，常规不建议用于流式检测。但Casiola-Rosen等已建立相关实验方法。