Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光

简要概述

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞凋亡的试剂盒，我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于监测细胞生存力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量Caspase 3的激活来监测细胞凋亡。由于caspase-3（CPP32 / apopain）的激活对于细胞凋亡的启动很重要，因此caspase 3被公认为是细胞凋亡的可靠指标。半胱天冬酶3具有对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）的底物选择性。该试剂盒使用Z-DEVD-ProRed 作为caspase-3活性的荧光指示剂。半胱天冬酶3对ProRed DEVD封闭肽残基的切割产生强红色荧光的ProRed ，该荧光在〜620 nm处以荧光光谱法进行监测，激发波长约为530 nm。该试剂盒可提供所有必需成分，并具有优化的测定方案，该测定适用于高通量测定。该试剂盒以96孔板每孔使用100 uL试剂，可提供足够的试剂来执行100次测定。该试剂盒以384孔板每孔使用25 uL试剂，可提供足够的试剂来执行400次测定。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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产品说明书

样本实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 3/7工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.监测Ex / Em = 540/620 nm处的荧光强度（截止= 610 nm）

溶液配制

储备溶液配制

1.Z-DEVD-ProRed 储备溶液（200X）：将65 µL DMSO加到Z-DEVD-ProRed （组分A）的小瓶中，制成200X Z-DEVD-ProRed 储备液，避光储存。

工作溶液配制

将50μL的200X Z-DEVD-ProRed 储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。 注意：分装并在-20℃下存储未使用的Z-DEVD-ProRed 储备溶液（来自步骤2.2）和测定缓冲液（组分B）。 避免重复冻结/解冻循环。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.准备细胞：

1.1 对于贴壁细胞：将细胞在生长培养基中以20,000个细胞/孔/ 90 uL接种96孔，或以5,000个细胞/孔/ 20 uL接种384孔，过夜培养。

1.2 对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀以80,000至200,000个细胞/孔/ 90 uL悬浮在培养基中，用于96孔；或20,000至50,000个细胞/孔/ 20 uL用于384个细胞。 实验前，将板以800 rpm的速度离心2分钟。 注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的细胞密度。

2.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 µL /孔的10X测试化合物（96孔板）或5 µL /孔的5X测试化合物（384孔板）来处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

3.将细胞板在37°C，5％CO₂的培养箱中孵育（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为3-4小时）以诱导凋亡。

4.加入Caspase 3/7底物工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板。）

5.在避光的条件下，在室温下孵育平板至少1小时。注意：如果需要，在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟，向选定的样品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂，以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。

6.使用荧光酶标仪（Ex / Em = 540/620 nm（截止= 610 nm））监控荧光强度。注意：有时，底部读取可提供更好的信噪比。如果使用底部读取模式，则以800 rpm的速度离心细胞板（特别是非粘附细胞）2分钟（制动）。

图示

图1. Jurkat细胞中Caspase 3/7活性的检测。 当天，将Jurkat细胞以200,000个细胞/ 90 µL /孔的密度接种在Costar黑色96孔板中。 用或不用1 µM星形孢菌素处理细胞5小时。 加入半胱天冬酶3/7工作溶液（100 µL /孔）并在室温下孵育1小时。 使用FlexStation荧光酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em = 540/620 nm（截止= 610 nm）下测量荧光强度。