MycoLight 荧光CTC活细菌定量试剂盒

简要概述

        MycoLight 荧光CTC活细菌定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌的试剂盒，CTC流式细胞术活菌分析试剂盒提供了一种简便的方法，可根据呼吸活动评估细菌的健康和活力。 CTC本身是非荧光的，一旦被活细菌细胞表面的电子转移系统还原，就会形成红色和不溶性荧光CTC甲maz，可以用流式细胞仪检测到。 不能呼吸的死细菌或以较低频率呼吸的不健康细菌将不产生或产生很少的带有CTC染色的红色荧光，因此可对细菌种群的健康状况进行半定量测量。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的MycoLight 荧光CTC活细菌定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备10倍染料储备液
2.准备细菌样本
3.将细菌样品与CTC在37°C孵育30分钟
4.PE-Texas Red通道通过流式细胞仪分析样品

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. CTC储备溶液（10倍）：
将1 mL蒸馏水加到CTC（组分A）小瓶中，制成10X储备液。 注意： 在-20°C稳定2周。 避光。

操作步骤

1.准备细菌样品，浓度为10⁶细胞/ ml。在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。通过以10,000 x g离心10分钟除去培养基，然后将沉淀重悬于适量的PBS中。注意：在波长= 600 nm（OD600）处测量细菌培养物的光密度，以确定细胞数。对于大肠杆菌培养，OD600 = 1.0等于8 x 10⁸细胞/ ml。

2.根据需要用测试化合物处理细胞。通过以10,000 x g离心10分钟来去除处理液，然后将沉淀物重新悬浮在适量的测定缓冲液（组分B）中，以使处理后样品中的细菌浓度与活菌浓度相同。注意：开始治疗之前，请确定细菌培养物的浓度。注意：死细菌可以作为阴性对照。建议用70％乙醇杀死细菌30分钟，然后煮沸60分钟。

3.将10 µL 10X CTC储备溶液加到90 µL细菌样品中。

4.充分混合，然后在黑暗中于37°C孵育30分钟。

5.在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加400 µL分析缓冲液（组分B）以增加体积。

6.用流式细胞仪通过PE-Taxes Red通道（Ex / Em = 488/615 nm）监测细菌的荧光。注意：要排除杂物，建议将流式细胞仪的阈值设置为以下值：FSC> 10,000，SSC> 5,000。注意：CTC的效率高度依赖菌株，因此会相应优化染色条件。

参考文献

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