大鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA试剂盒操作步骤:

　　1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。

　　2．空白孔加标准品和标本稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔)，用封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育90分钟。

　　3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液。

　　4．洗板5次。

　　5．空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育60分钟。

　　6．提前20分钟准备酶结合物工作液。避光室温(22-25 ) ℃ 放置。

　　7．洗板5次。

　　8．空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱，避光孵育30分钟。

　　9．打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

　　10．洗板5次。

　　11．加入显色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分钟。

　　12．加入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。

　　13．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。

　　建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。

　　大鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA试剂盒结果判断:

　　1. 每个标准品和标本的OD值应减去空白孔的OD值。

　　2. 手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

3. 若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，大鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA试剂盒计算浓度时应乘以稀释倍数。