线粒体膜电位荧光探针JC-10 JC-1的 代替品

产品介绍

JC-1在实验室广泛应用，但其水溶性差（即使在1μM浓度下也易在水性缓冲液中沉淀）限制了部分应用场景。为此我们开发了JC-10作为高浓度需求下的替代方案，其水溶性显著优于JC-1。JC-10能选择性进入线粒体，并随膜电位升高发生可逆的荧光颜色转变（绿色→橙绿色），该特性源于膜极化诱导的J-聚集体可逆形成：单体发射峰520nm（绿），聚集体发射峰570nm（橙）。当490nm激发时，线粒体膜电位极化程度增加将导致荧光颜色从绿色向橙绿色渐变。两种荧光信号可通过流式细胞仪常规配置的滤光片检测（FL1通道检测绿色信号，FL2通道检测橙绿色信号）。除流式检测外，JC-10同样适用于荧光显微成像，我们已开发配套的微孔板检测方案。在某些细胞系中，JC-10表现甚至优于JC-1，但其性能存在细胞系依赖性。

注意事项

本产品以~3mM（2mg/mL）的DMSO溶液形式提供，便于直接使用

注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

JC-10的分析方案

概述

准备含有测试化合物的细胞

添加JC-10工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）

在室温或37 ℃孵育1小时

在Ex读取荧光强度 / Em = 490 / 525nm和540 / 590nm

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。 该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

操作步骤

1.准备JC-10工作溶液：

1.1每瓶DMSO原液（100μL，2 mg / mL，3 mM）只能使用一次。任何未使用的小瓶应储存在<-20℃。注意：避免反复冻融循环，并避光.

1.2准备1X JC-10工作溶液：在实验当天，解冻一份JC-10 stockolution到室温。在Hanks和20 mM Hepesbuffer（HHBS）或您选择的缓冲液（pH 7-8，含0.02％Pluronic [表情] F-127）中制备10至30μM1X工作溶液。通过votexing将它们混合均匀。注意：对于某些细胞系，pH值为8的工作溶液可能会阻止JC-10泄漏。

2.用荧光酶标仪进行JC-10检测：

2.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

2.2将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-10工作溶液（来自步骤1.2）加入到细胞板中。

2.3将JC-10加载板在37 oC，5％CO2培养箱中孵育15-60分钟。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

2.4监测Ex / Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/590 nm（TRITC通道）的荧光变化，进行比率分析。

可选：从板上取下JC-10工作溶液; 在分析之前，将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。

3.用荧光 或流式细胞仪进行JC-10检测：

3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。

3.2离心细胞，每管取1-5×105个细胞。

3.3将细胞重悬于500μLJC-10工作溶液中（来自步骤1.2）。

3.4在室温或37°C，5％CO2培养箱中孵育10至30分钟，避光。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

3.5使用荧光 （使用FITC和TRITC过滤器）或流式细胞仪（使用FL1和FL2通道）监测Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm处的荧光变化。可选：移除JC-10工作 从板上解决; 在荧光 下分析之前，将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。