Amplite 荧光法锌离子定量试剂盒

 Amplite 荧光法锌离子定量试剂盒是AAT Bioquest生产的用于检测锌离子的试剂盒，锌是一种必需的微量元素，在许多生物过程中起着重要作用。它是许多酶，蛋白质结构和遗传表达控制所必需的必需因子。锌的状态也会影响细胞分裂，生长，分化，发育和衰老的基本过程。缺锌的临床症状包括皮质炎，腹泻，愈合不良，发育迟缓，性腺机能减退，胎儿生长障碍和畸形。在研究发现中非常需要简单，直接和自动化的锌离子测量程序。 

AAT Bioquest的Amplite 比色锌定量试剂盒使用我们专有的Zn-620 提供了一种检测生物样品中锌浓度的稳健方法，其中锌与探针结合，增强吸收在620 nm附近。在无锌溶液中，吸光度为480nm，而当锌离子与探针结合时，其在620nm处显示出大的增加（> 100倍）。锌的浓度可以用比色法测定，吸光度比为A610nm / A480nm。该检测方法可用于血清，血浆和尿液等生物样品，检测灵敏度为2μM（130 ng / mL）。 AAT Bioquest的Amplite 荧光锌定量试剂盒（＃19000）更加灵敏，可用于检测低至0.2 uM的Zn离子。

实验方案

测试样品（50μL）或Zn²⁺

添加锌探针试剂50μL

在室温下孵育5-10分钟读取A610nm / A480nm的吸光度比

操作步骤

1.ZnCl₂标准品和试样制剂：

1.1将10μL的100mM ZnCl₂标准溶液（组分C）加入990L测定缓冲液（组分B）中，得到1mM ZnCl₂标准溶液。

1.2将10μL的1mM锌标准溶液（组分C）加入到990L测定缓冲液（组分B）中，得到100μMZnCl₂标准溶液。

1.3取300μL的100μMZnCl2标准溶液（来自步骤1.2）进行1：2连续稀释，得到50,25,12.5,6.25,3.13,1.56和0μM连续稀释的ZnCl2标准品。

1.4用测定缓冲液（组分B）将测试样品稀释至5-100μM范围。加入50μLZnCl2标准品，稀释样品并对照到每个孔中，如说明书中的表1和2所示。

2.运行锌测定：

2.1将25μLZn-620（组分A）加入5 mL测定缓冲液（组分B）中以制备Zn测定混合物。 向ZnCl₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLZn测定混合物（参见说明书中步骤1.5，表1和2）以使总ZnCl₂测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

2.2在室温下孵育反应5-10分钟，避光。

2.3用吸光度读板仪在610 nm和480 nm处检测吸光度的增加。