公司介绍     

     生物药物分析方法开发   分析方法验证      高品质科研elisa试剂盒、化学发光试剂盒开发与定制供科研使用，不得用于临床检验。

产品特点

      猪A型口蹄疫抗体ELISA试剂盒（定性）本发明检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的ELISA试剂盒及其方法，属于生物技术领域。试剂盒包括以重组N蛋白作为包被抗原的ELISA板条、PBS溶液、血清稀释液、兔抗猪酶标二抗、显色底物、终止液、PRRS阳性血清、PRRS阴性血清等。该方法经特异性、敏感性、重复性等指标的检验后，将其用于血清样品的检测。本发明的优势体现在有良好的特异性、可大量生产以及检测成本低廉。与IDEXX公司ELISA试剂盒的检测符合率为91％。大大降低了检测成本，有着良好的应用前景。

   工作原理

      猪A型口蹄疫抗体ELISA试剂盒（定性）本文采用猪瘟抗体间接ELISA和阻断ELISA检测试剂盒对320份血清样本进行猪瘟抗体检测,符合率达80.63%,对检测结果不一致的样品,利用抗体中和试验(FVNT)做定性检测,结果表明,间接ELISA试剂盒的敏感性和特异性均高于阻断ELISA试剂盒,猪瘟间接ELISA试剂盒更适用于我国猪瘟抗体检测。通过对猪伪狂犬病毒gE抗体的3种ELISA试剂盒比较试验数据分析,3种试剂盒检测值均呈极显著的相关关系(P0.01)。检测定性结果一致程度较高,其中HIPRA与IDEXX一致性强度为极强(Kappa=0.808),且其符合率达89.4%;HIPRA与LSI、LSI与IDEXX均为高度一致(Kappa=0.732、0.724),且其符合率依次为85.6%、85.3%。经gE抗体阳性率检测结果统计学检验,3种试剂盒gE抗体阳性率之间差异均不显著(P0.05),其检测灵敏度从高到低次序为LSI、IDEXX和HIPRA。临床应用数据分析表明,LSI检测样品存在1.26%假阳性结果,使用LSI检测gE抗体易造成临床猪伪狂犬误诊,为降低误诊率须加大检测群体的样本数或要求有阻断率≥76.73%的样品存在。在临床样品检测群体定性中HIPRA、IDEXX与临床相符率均达100%,LSI与临床相符率为95.5%,其中相符率LSI与HIPRA差异显著(P0.05)。从猪伪狂犬病净化角度来说,3种试剂盒均可使用,但若用于猪伪狂犬病诊断或了解群体猪伪狂犬病毒野毒感染程度则宜采用HIPRA或IDEXX试剂盒。在实际应用中除选择合适的试剂盒外还应注意检测数据的科学分析。以纯化的猪伪狂犬病病毒gE蛋白为抗原建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接gE-ELISA方法。最佳反应条件为，抗原包被浓度为1．7μg／mL，待检测血清1：40稀释。与伪狂犬病阳性血清反应为阳性，与猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和猪伪狂犬病gE缺失疫苗接种的猪免疫血清及SPF猪阴性血清均无交叉反应。批间、批内试验变异系数分别不超过5％和9％。

应用案例

      猪A型口蹄疫抗体ELISA试剂盒（定性）用该方法与Ingezim ELISA试剂盒和HerdChek ELISA试剂盒同时对172份血清进行了平行检测，总符合率分别达93．6％和83．7％。试验结果表明：猪伪狂犬病血清抗体间接gE-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性，且重复性好，可用于猪伪狂犬病野毒感染猪的血清抗体检测。为建立一种快速的猪伪狂犬病毒抗体检测方法,本研究参照已发表的PRV SA株基因组序列,PCR扩增了长约1 070 bp的gD基因片段,将目的片段定向克隆到pET30a原核表达载体,转化BL21表达菌,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组gD蛋白.重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性.

注意事项

      猪A型口蹄疫抗体ELISA试剂盒（定性）以该蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗,建立了检测猪伪狂犬病毒抗体的PPA-ELISA检测方法.该方法与其他7种常见猪病病毒(CSFV、PPV、PRRSV、JEV、PCV-2、PEDV、TGEV)的阳性血清不发生交叉反应;批内重复性试验的变异系数小于5％,批间重复性试验的变异系数小于10％;与IDEXX gD-ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为92.0％、95.1％和88.1％.本研究建立的PRV gD-PPA-ELISA抗体检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PRV的免疫猪群抗体监测、快速诊断和PRV流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法.利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2) Cap蛋白作为检测抗原，建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒，对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化，制备了5批重组蛋白抗原，表达量占总蛋白的18.7 %左右；Ni2＋亲和层析柱纯化获得重组蛋白纯度为90.1 %；重组蛋白可被特异性抗体识别，具有良好的免疫活性。用建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD405nm值为0.343；ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3 %，特异性为91.2 %，敏感性为96.5 % ；与其他几种常见猪病毒参考血清无交叉反应。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0 %～4.8 %和8.9 %～9.9 %；置-20 ℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果，接种后第5周抗体阳转，第8周～9周抗体水平达到高峰；对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1 085份血清抗体检测，阳性率为73.6 %。

性能特点

      猪A型口蹄疫抗体ELISA试剂盒（定性）研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。采用差速离心、透析、聚乙二醇(PEG)浓缩方法纯化猪细小病毒 (PPV DK 7113)制备抗原.用纯化的PPV抗原包被聚苯乙烯微量反应板,建立了检测PPV血清抗体的间接ELISA.抗原最佳包被浓度为6.3μg/ml,被检 血清最佳稀释度为1:200.用建立的ELISA检测山东、东北、广东等地的426份血清,结果阳性率为36.2%.与华中农大病毒室提供的猪细小病毒乳 胶凝集试验试剂盒相比,其结果符合率为98.6%.通过阻断试验、交叉试验,说明本方法在特异性上达到了较为满意的结果,且易于操作,适用于血清学定性诊 断、检疫和大规模的血清流行病学调查.本实验以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA方法。应用该法检测从江苏、安徽、山东、浙江四省部分地区收集到的739份血样,对华东地区猪乙型脑炎血清流行病学进行初步调查,检测结果JEV抗体阳性率为78.9%,其中,种猪JEV抗体阳性率为85.7%,商品猪JEV抗体阳性率为67.3%.从中随机抽取135份血样与国产商品化试剂盒进行比较,间接ELISA方法的特异性和敏感性分别为92%和96.4%,两种方法的符合率为95.6%.与NSI蛋白包被建立的ELISA比较,两者的符合率为97.7%.同时,本法的阳性检出率显著高于临床普遍使用的乳胶凝集试验结果.表明本实验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于大规模猪乙型脑炎血清流行病学调查。