货号
YKE40003产品名称
通用名称:猪伪狂犬病毒 gB 抗体定性检测试剂盒(ELISA)
英文名称:Test Kit for Antibodies to Porcine Pseudorabies Virus gB ELISA KIT
包装规格
96 人份/盒
预期用途
仅供科研使用,伪狂犬病又名奥耶斯基氏病(Aujeszky's disease),是由伪狂犬病毒
(Pseudorabies Virus,PRV)引起的家畜和多种野生动物的一种以发热、奇痒、呼吸和神经系统疾病为特征的急性传染病。
本试剂用于检测猪血清中猪伪狂犬病毒 gB 抗体,可用于猪伪狂犬病毒疫苗免疫效果评价。
检验原理
本试剂盒系由预包被猪伪狂犬病毒重组 gB 蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成, 应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中猪伪狂犬病毒 gB 抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有猪伪狂犬病毒 gB 抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加 TMB 底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在 450nm 波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有猪伪狂犬病毒 gB 抗体。
检验方法
1. 使用前将试剂盒置室温 30 分钟,恢复至室温。
2. 取所需用量酶标板条,设空白对照 1 孔、阴性/阳性对照各 2 孔,未用的板条尽快密封,
28保存。
3. 空白对照孔加样品稀释液 100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照 100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品 100μl。
4. 混匀,置 37
反应 30 分钟。5. 扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,重复洗涤 5 次,拍干。
6. 每孔加酶标记物 100μl(空白孔除外)。置 37
反应 30 分钟。7. 洗涤,同步骤 5。
8. 每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl,混匀,37
避光反应 10 分钟。9. 每孔加终止液 50μl,混匀,于 450nm(可用 630nm 作参比波长)测定各孔吸光值(A 值),无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。
参考值
实验正常的情况下,阴性对照0.10,阳性对照0.6。
检验结果的解释
1. 样品 A 值0.38 为阳性;样品 A 值在 0.2 到 0.38 之间为可疑;样品 A 值<0.2 为阴性。
2. 本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足,建议补打相应疫苗。
试验方法的局限性
该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪伪狂犬病毒 gB 抗体,根据 A 值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
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